معرفی و بررسی کیت HCG
1ـ معرفی: این کیت جهت اندازه گیری هورمون HCG بر اساس سنجش رادیوایمونواسی آنزیمی ساندویچی طراحی شده است.
2ـ اصول آزمایش: یکی از هورمون هایی که جفت در زنان تولید می کند هورمون پروتئینی شامل گنادوتروپین جفتی انسان (HCG Human chorionic gonadotropin) می باشد. که پس از باروری از تخمک ترشح می شود.
این هورمون از دو زیرواحدگلیکوپروتئینی غیر مشابه α و β تشکیل شده است که زیرواحد α در بعضی هورمون های دیگر (LH.FSH.TSH)مشابه است ولی زیر واحد بتا با آن ها متفاوت است.
جستجوی HCG در سرم (حدود 8 روز بعد از بارداری) و ادرار (حدود دو هفته بعد از عقب افتادن خونریزی ماهیانه) در تشخیص بارداری اهمیت دارد کاربردهای بالینی دیگر اندازه گیری مقادیر سرمی HCG در تشخیص حاملگی های خارج رحمی، سقط، نئوپلاسم های تروفوبلاستیک و سندروم داون می باشد.
به دنبال کشف روش سنجش ایمنی ساندویچی HCG می توان حتی سطوح بسیار اندک HCG را حتی 7 ـ 3 روز بعد از لقاح شناسائی کرد.
علاوه بر حاملگی ممکن است HCG در موارد زیر ترشح شود: مثل تومورهای سمینومایی و غیر سمینومانی بیضه، تومورهای ژرم سل تخمدانی، بیماری تروفوبلاستیک، حاملگی (نظیر مول هیداتی فرم) و تراتوم های خوش خیم یا بدخیم غیر بیضه ای.
3ـ اساس روش آزمایش: این کیت بر اساس روش ایمونواسی آنزیمی ساندویچی می باشد. HCG موجود در نمونه ها به عنوان آنتی ژن می باشد. و دو آنتی بادی اختصاصی منوکلونال در این کیت وجود دارد که یکی از آن ها در چاهک ها پوشیده شده است و دیگری به آنزیم HRP متصل می باشد. و در هنگامی که نمونه ها به چاهک اضافه می شود HCG موجود به آنتی بادی پوشیده شده در چاهک ها متصل می گردد و آنتی بادی متصل به HRP نیز به کمپلکس آنتی ژن ـ آنتی بادی (HCG-Anti HCG)اتصال می یابد در واقع هورمون HCG بین دو آنتی بادی ساندویچ می گردد. و سپس با شستشو و تخلیه مواد اضافه، محلول سوبسترای رنگ زا اضافه می گردد. و فعالیت آنزیم رابطه مستقیم با اندازه HCG دارد. و بعد از اضافه کردن محلول متوقف کننده، اتمام واکنش آنزیمی انجام میشود. و جذب نوری نمونه و استانداردها وکنترل در طول موج 450 نانومتر خوانده میشود.
4ـ اجزاء کیت:
4ـ 1ـ میکروپلیت پوشش داده شده با آنتی بادی منوکلونال موشی ضد HCG که حاوی 96 چاهک می باشد.
4ـ 2ـ کونژوگه آنزیمی (HRP-Anti-HCG) که حاوی 12 میلی لیتر محلول در یک ویال می‌باشد.
4ـ 3ـ استانداردها: که دارای 7 ویال یک میلی لیتری از محلول استاندارد به غلظت های 0 و 25 و 50 و 100 و 250 و 500 و 1000 /ml mIu که در سرم انسانی می باشد.
4ـ 4ـ سرم کنترل: یک ویال یک میلی لیتری آماده مصرف
4ـ 5ـ محلول شستشو دهنده غلیظ (20x): یک ویال که حاوی 25 میلی لیتر محلول شستشو دهنده می باشد که برای تبدیل به محلول آماده مصرف باید به نسبت با آب مقطر رقیق شود.
4ـ 6ـ محلول رنگ زا (chromogen – substrate): که حاوی 12 میلی لیتر محلول آماده مصرف در یک ویال می باشد.
4ـ 7ـ محلول متوقف کننده (stop-solution): که حاوی 12 میلی لیتر محلول اسیدسولفوریک یک نرمال می‌باشد.
